دانلود پایان نامه دکتری رشته زیست شناسی درباره نقشه یابی فیزیکی مقایسه ای ژن های BMPR1B، BMP15 و GDF9 با استفاده از تکنیک FISH روی کروموزوم های گاو، گاومیش رودخانه ای

دانلود پایان نامه

پایان نامه

عنوان کامل پایان نامه کارشناسی ارشد :نقشه یابی فیزیکی مقایسه ای ژن های BMPR1B، BMP15 و GDF9 با بهره گیری از تکنیک FISH روی کروموزوم های گاو، گاومیش رودخانه ای، گوسفند و بز 

تکه ای از متن پایان نامه :

3 – 1- 2 کشت سلول های خونی با روش RB و انتخاب اسلاید های  مناسب برای FISH

به علت راحتی کشت و کار کردن و هم چنین شاخص متافازی بالا غالباً از لنفوسیت های خون برای کشت در اکثر آزمایشگاه ها برای FISH  بهره گیری می گردد. در پژوهش حاضر از روشRB  با وضوح بالا برای کشت سلول های خونی بهره گیری گردید (در این روش حرف لاتین R نشان دهنده کلمه Reverse  می باشد و به معنی توليد باندهاي كروموزومي معكوس نسبت به روش G-باندينگ می باشد) که با وارد سازی دیر هنگام برومودی یوراسیل (BrdU) و Hoechst33258 به محیط کشت همراه می باشد (به فصل دوم بخش 2-6-3 مراجعه گردد). مواد بهره گیری شده در كشت سلولي براي هر كدام از گونه هاي مورد مطالعه در جدول 3-1 آورده شده اند. پس از تهيه مخلوط كشت زير هود استريل، فلاسك هاي حاوي محيط هاي كشت به مدت 72 ساعت در دمای 5/37 درجه سانتی گراد قرار داده شدند. برای خارج سازی CO2  حاصل شده از روند کشت سلول ها هر روز یک بار با باز و بسته كردن درب فلاسک ها گاز جمع شده در فلاسك را خارج نموديم. براي هر گونه حداقل 20 كشت در هر آزمايش انجام مي گردید. زمان اضافه کردن BrdU  ، Hoechst 33258 به محیط کشت به ترتیب برای گاو، گاومیش، گوسفند و بز به 6، 6، 5/5 و 6 ساعت قبل از اتمام کشت بود. در پژوهش حاضر از کونکاناوالین-A به عنوان عامل ميتوژن بهره گیری گردید. سایر میتوژن ها مانند لکتین برای خوک، اسب، میمون، و سگ مناسب هستند. کلسمید یک ساعت قبل از پایان کشت به محیط کشت گاو، گاومیش و بز و50 دقیقه قبل از پايان كشت به محیط کشت گوسفند اضافه گردید.

يك ساعت قبل از اتمام كشت، محلول هیپوتونیک (KCL 075/0 مولار) را تهیه نموده و در انکوباتور 5/37 درجه سانتی گراد قرار دادیم. بعد از 72 ساعت، نمونه هاي خون از انکوباتور خارج نموده و به لوله های سانتریفیوژ انتقال داده شدند. مراحل تيمار هيپوتونيك و فيكساتيو و تهيه اسلايدهاي متافازي با در نظر داشتن روش يانوزي و دي براردينو (2008) انجام گردید. پس از تهيه اسلايدها، تراكم سلول هاي كشت شده و شاخص ميتوزي زير ميكروسكوپ فاز كنتراست بررسي شدند. براي انتخاب يك اسلايد متافازي خوب براي FISH بايد در يك محدوده 2 سانتي متر مربع روي اسلايد حداقل 20-15 متافاز با گستردگي خوب و اندازه كروموزومي متوسط وجود داشته باشد. اگر در محدوده مورد نظر براي FISH تعداد زيادي (بيش از 20 عدد) متافاز وجود داشته باشد براي ورود پروب ها به متافازها دچار مشكل خواهيم گردید.  علاوه بر اين، بايد سلول هاي سطح اسلايد نيز از اندازه كافي برخوردار باشند كه نشان دهنده رشد خوب سلول ها در فرآيند كشت می باشد. پس از شناسايي و انتخاب اسلايد مناسب براي هر حيوان، يك كلون BAC حاوي يكي از ژن هاي مورد مطالعه را براي آن اسلايد در نظر گرفته و نام BAC مورد نظر در كنار اسلايد يادداشت گردید. اسلايدها تا زمان بهره گیری در FISH در فريزر نگهداري شدند.

نقشه یابی فیزیکی مقایسه ای ژن های BMPR1B، BMP15 و GDF9 با بهره گیری از تکنیک FISH روی کروموزوم های گاو، گاوميش رودخانه ای، گوسفند و بز

برای دیدن تکه های بیشتری از این پایان نامه و دانلود فایل پایان نامه با فرمت ورد ، خرید و دانلود آنی فایل متن کامل با فرمت ورد می توانید به لینک پایین صفحه مراجعه نمایید:

 دانلود از لینک پایین صفحه

این نوشته در پایان نامه های ارشد ارسال شده است. افزودن پیوند یکتا به علاقه‌مندی‌ها.